線粒體檸檬酸(MCA)含量測試盒
測定方法: 分光光度法
測定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意: 正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
CA是線粒體三羧酸循環(huán)的 個中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。
測定原理:
CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。
自備儀器和用品:
分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入15mL蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,10μmol/mL檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
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