檸檬酸(CA)含量測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
CA是生物體內常見的有機酸,是重要的食品風味物質。此外,CA是三羧酸循環 步反應的產物。
測定原理:
酸性條件下,檸檬酸還原Cr6+生成Cr3+,在545nm處有特征吸收峰;通過測定545nm吸光值的增加,即可計算出樣品中檸檬酸含量。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
樣品中檸檬酸提取:
1.液體樣品中檸檬酸提取:取0.1mL液體加試劑一0.9mL,充分混勻,11000g, 4℃離心10min,取上清液,待測。
2.組織中檸檬酸提取:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。11000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
3.線粒體中檸檬酸提取:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,600g/min,4℃離心5min;取上清至另一EP管中,11000g,4℃離心10min,棄上清(此上清液可用于細胞質CA含量測定);向沉淀中加試劑二200μl,以及試劑三2μl,充分懸浮溶解,11000g,4℃離心10min,取上清液,待測。
4.按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);11000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
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