在一定條件下，微生物分解水中有機物所消耗溶解氧的量稱為生化需氧量，用BOD表示，單位為(O2，m/L)。它也是水體有機物污染的綜合指標之一。由于水中有機物的生物氧化是一種緩慢的過程，所以規定以20℃為標準溫度、用5d作為BOD測定的標準時間，即將水樣置于20±1℃下培養5d，培養前后溶解氧之差就是生化需氧量，用BOD205表示。

　　BOD205的測定中，根據水樣中DO和有機物含量的多少，分為直接測定法和稀釋測定法。

　　①直接測定法 溶解氧含量較高、有機物含量較少的清潔地面水，一般BOD205<7mg/L時，可不經稀釋直接測定。將水溫調整至20℃左右，用曝氣法使水中溶解氧接近飽和，直接以虹吸法將水樣轉移入數個溶解氧瓶內。其中至少一瓶應立即測定水中的溶解氧，其余的溶解氧瓶水封后放入培養箱中，20±1℃下培養5d，測定剩余的溶解氧。則：

剩余的溶解氧的計算公式

　　②稀釋測定法 有機物含量較高的生活污水和工業廢水以及污染嚴重的天然水，BOD205都大于7mg/L，且往往BOD超過水平所含的溶解氧量，故必須用含有飽和溶解氧的水稀釋后再培養。稀釋水含有一定養分和飽和溶解氧，如果水樣中缺乏微生物，則必須在稀釋水中接種微生物(一般1L稀釋水中加入2mL沉淀生活污水或不含大量藻類或硝化細菌的河水)。最后根據培養前后溶解氧的變化和水樣的稀釋比，求算水中生化需氧量。

　　稀釋水或接種稀釋水中可能含有耗氧有機物，因此必須校正。

水中生化需氧量的計算

　　式中 C1——水樣培養前的DO濃度(O2)，mg/L;

　　 C2——水樣經5d培養后的DO濃度(O2)，mg/L;

　　 B1——稀釋水或接種稀釋水培養前的DO濃度(O2)，mg/L;

　　 B2——稀釋水或接種稀釋水培養后的DO濃度(O2)，mg/L;

　　 f1——稀釋水或接種稀釋水在培養液中所占的比例;

　　 f2——水樣在培養液中所占的比例。

　　f1、f2的計算：如培養液的稀釋比為4%、則f1=0.96、f2=0.04。

　　BOD205的測定方法適用于江河湖水、生活污水、一般工業廢水。