線粒體呼吸鏈復合體Ⅳ/氧化酶測試盒
測定方法: 微量法
測定規格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
線粒體復合體Ⅳ又稱氧化酶,也是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分,負責催化還原型的氧化,并終把電子傳遞給氧,生成水。
測定原理:
還原型在550nm有特征光吸收,線粒體復合體Ⅳ催化還原型生成氧化型,因此550nm光吸收下降速率能夠反映線粒體復合體Ⅳ酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
測定步驟:測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至550nm,蒸餾水調零。
2、樣本測定
(1)工作液的配制:臨用前將試劑五和試劑六依次轉移到試劑四中混合溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)孵育5min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融。(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入20μL樣本和200μL工作液,混勻,記錄550nm處初始吸光值A1和 37℃反應30min后的吸光值A2,計算ΔA=A1-A2。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、25μL試劑六和200μL工作液,立即混勻,記錄550nm處初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。
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