梯度洗脫是指在同一個(gè)分析周期中隨著時(shí)間的變化按一定程序梯度性地改變洗脫液的比例(濃度配比、成分、離子強(qiáng)度、溶液極性等)或pH，以期將層析柱上不同的組分洗脫出來(lái)的方法。從而可以使一個(gè)復(fù)雜樣品中性質(zhì)（極性）差異較大的組分能按各自適宜的容量因 子k達(dá)到良好的分離目的。梯度洗脫一般分為二元高壓梯度，二元低壓梯度和四元低壓梯度；二元高壓梯度需要兩臺(tái)高壓泵，二元低壓梯度和四元低壓梯度都是只需要一臺(tái)高壓泵和一個(gè)比列閥。

 　梯度洗脫的原理如下：
 　具體地講，當(dāng)樣品隨梯度起點(diǎn)的流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱入口時(shí)，由于起點(diǎn)流動(dòng)相中弱洗脫溶劑A含量較高，強(qiáng)洗脫溶劑B含量較低，化合物C1(保留性適中)和化合物C2(保留較強(qiáng))因分配系數(shù)(k值)較高而滯留于色譜柱入口附近，幾乎未移動(dòng)。一段時(shí)間后，B增加到一定數(shù)值，C1的k值達(dá)到足夠小(比如小于10)，其在柱中的移動(dòng)速率明顯增大，并且隨著B(niǎo)的增加，其移動(dòng)速率愈加快速，直到tC1時(shí)流出色譜柱，被檢測(cè)器檢測(cè)到并被記錄成色譜峰C1，tC1雖然比等度時(shí)的保留時(shí)間長(zhǎng)很多，但C1的的平均k值卻很小，因而色譜峰并未展寬，靈敏度仍處于較高水平。B持續(xù)增加，在隨后的某個(gè)時(shí)間點(diǎn)，C2的k值也降到10以下，C2的移動(dòng)速率也開(kāi)始變快，以與C1類(lèi)似的方式于tC2被洗脫出色譜柱，其平均k值同樣很小，色譜峰亦未展寬，靈敏度處于較高水平。
流動(dòng)相的梯度變化即流動(dòng)相極性、PH值等的梯度變化，即洗脫能力成梯度變化。

 　梯度洗脫配置相對(duì)復(fù)雜，配置特點(diǎn)：
 　1. 二元高壓梯度洗脫需要配置兩臺(tái)高壓泵，一個(gè)混合器及連接管理，配置較高，成本高；
 　2. 二元低壓梯度洗脫需要配置一臺(tái)高壓泵、一個(gè)二元比例閥、一臺(tái)在線脫氣機(jī)、一個(gè)混合器（脫氣機(jī)和混合器視情況而定，可不選）及連接管路，配置較低，成本較低；
 　3. 四元低壓梯度洗脫需要配置一臺(tái)高壓泵、一個(gè)四元比例閥、一臺(tái)在線脫氣機(jī)、一個(gè)混合器（視情況而定，可不選）及連接管路，配置較高，成本較低。