（1）乳糖發酵試驗 該試驗根據大腸菌群能發酵乳糖并產酸產氣的生化特性來進行。將水樣接種于含乳糖的液體培養基，37℃培養24h后，觀察產酸產氣情況，若產酸產氣則為陽性反應。由于水中除大腸菌群外，還有一些也能發酵乳糖并產酸產氣的非大腸菌群細菌，因此陽性反應只能推測大腸菌群存在的可能性，需要進一步做確定試驗。

　　（2）分離培養 該試驗包括鑒別和鏡檢兩部分，是根據大腸菌群在鑒別培養基上生長并形成典型菌落、革蘭氏染色陰性和無芽孢的特征來進行的。將推測試驗中呈陽性反應的菌液接種于伊紅美藍培養基或遠藤氏培養基。這類培養基能抑制非大腸菌群細菌的生長，而有利于大腸菌群的生長并形成典型特征的菌落。大腸菌群在伊紅美藍培養基上的典型菌落特征是：①深紫黑色，具有金屬光澤;②紫黑色，不帶或略帶金屬光澤;③邊緣淡紫紅色，中心深紫色。大腸菌群在遠藤氏培養基上典型的菌落特征是：①紫紅色，具有金屬光澤;②深紅色，不帶或略帶金屬光澤;③邊緣淡紅色，中心深紅色。

　　接種于上述培養基上的細菌37℃培養24h后，若有大腸菌群典型菌落形成，則對典型菌落的細菌進行革蘭氏染色，經鏡檢證實為甘蘭氏染色陰性無芽孢桿菌，可初步確定有大腸菌群存在，但還要作驗證試驗。

　　（3）證實試驗 該試驗主要驗證革蘭氏陰性無芽孢桿菌能否使乳糖發酵并產酸產氣。從確定試驗中選取一些證實為甘蘭氏陰性無芽孢桿菌的菌落，接種于乳糖液體培養基中，經37℃培養24h。若產酸產氣，即證實有大腸菌群存在。

　　根據證實為總大腸菌群陽性的管數查MPN檢索表，報告每100mL，水樣中的總大腸菌群MPN值。如所有乳糖發酵管均陰性時可報告未檢出總大腸菌群。