摘要：淫羊藿苷為箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿等干燥莖葉提取物。本品呈淡黃色針狀結晶粉末，分子量為676.65。

目的建立淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法。色譜柱為ZorbaxSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈-水（25︰75，V/V），流速1.0mL/min；檢測波長270nm。結果淫羊藿苷的進樣量與其峰面積積分值在0.09984～0.59904μg范圍內有良好的線性關系（r＝0.9998），平均加樣回收率為97.77%，RSD＝1.77%（n＝6）。結論本法簡便可行，準確可靠，可用于淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量測定。

「關鍵詞」淫羊藿苷；淫黃膠囊；高效液相色譜法Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofthecontentoficariininYinhuangCapsules.MethodsTheHPLCassaywasperformedonaZorbaxSB-C18column（250mm×4.6mm，5μm）withthephaseofacetonitrile-aquous（25︰75，V/V）ataflowrateof1.0mL/min，andthedetectivewavelengthwas270nm.ResultsAgoodlinearityoficariinwasobtainedintherangeof0.09984～0.59904μg（r＝0.9998）.Theaveragerecoverywas97.77%andRSDwas1.77%（n＝6）.ConclusionThemethodissimple，feasible，accurateandreliable.ItcanbeappliedtothedeterminationoficariininYinhuangCapsules.Keywords：icariin；YinhuangCapsules；HPLC淫黃膠囊是由淫羊藿、黃芪組成的中藥復方制劑，具有補氣健腎之功，主要用于治療腎病綜合征。該制劑中主要藥味淫羊藿主要含有黃酮類、多糖，其中黃酮類成分淫羊藿苷為淫羊藿的主要特征性有效成分。為了有效控制該制劑的質量，本實驗建立了以高效液相色譜法測定制劑中淫羊藿苷含量的方法。

1儀器與試藥Agilent1100高效液相色譜系統（自動脫氣機、VWD檢測器，美國產）。淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號0737-200111，供含量測定用）；淫黃膠囊（本院中藥藥劑實驗室研制，批號、20050523、）。乙腈為色譜純（美國Tedia公司）；水為注射用水；其余試劑均為分析純。

2方法與結果2.1色譜條件色譜柱：ZorbaxSB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（25︰75，V/V）；流速：1.0mL/min；檢測波長：270nm。理論塔板數按淫羊藿苷計算不低于2500。

2.2檢測波長的確定取淫羊藿苷對照品適量，用50%乙醇溶解、稀釋成濃度約為1mg/mL的溶液，以50%乙醇為空白，在400～200nm波長范圍內掃描，結果淫羊藿苷在270nm波長處有吸收。

2.3標準曲線的制備精密稱取淫羊藿苷對照品10.40mg，置50mL量瓶中，加50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為208.0μg/mL的對照品儲備液。分別從中精密吸取0.6、1.2、1.8、2.4、3.0、3.6mL置于25mL量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，得系列濃度的對照品溶液。分別精密吸取各濃度對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以淫羊藿苷進樣量為橫坐標，以峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為：Y＝－5.953＋2107.944X，r＝0.9998。結果表明，淫羊藿苷進樣量在0.09984～0.59904μg范圍內與其峰面積積分值有良好的線性關系。

2.4供試品溶液的制備取淫黃膠囊10粒內容物，研細，取細粉約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，稱定重量，超聲處理（功率200W，頻率59kHz）45min，放置，冷至室溫，稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液4mL置水浴上蒸干，加水10mL溶解，以乙酸乙酯萃取3次，每次10mL，合并乙酸乙酯萃取液，減壓回收溶劑至干，殘渣加50%乙醇溶解并定容至25mL量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。

2.5陰性干擾試驗按處方制法制備缺淫羊藿的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。分別吸取淫羊藿苷對照品溶液（14.976μg/mL）、供試品溶液、陰性對照溶液各20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖（見圖1）。結果表明，在淫羊藿苷色譜峰位置處陰性無干擾。

2.6精密度試驗精密吸取淫羊藿苷對照品溶液（14.976μg/mL）20μL，注入液相色譜儀，重復進樣5次。結果峰面積積分值RSD＝1.03%，表明精密度良好。

2.7穩定性試驗取同一份供試品溶液（批號），分別于0、2、4、6、8h時進樣20μL，按上述色譜條件測定，峰面積積分值RSD＝1.39%。結果表明，供試品溶液中淫羊藿苷至少在8h內穩定性良好。

2.8重復性試驗取同一批淫黃膠囊（批號）5份，分別按“2.4”項下方法制備供試品溶液，進樣20μL，按上述色譜條件測定，計算淫羊藿苷含量，結果RSD＝2.92%。

2.9加樣回收率試驗取已測定含量的淫黃膠囊（批號）內容物，研細，稱取6份，各約0.1g，精密稱定，分別精密加入淫羊藿苷對照品儲備液（208.0μg/mL）5mL，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率。結果見表1。表1加樣回收率試驗結果（略）

2.10樣品測定取淫黃膠囊樣品3批，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，進樣20μL，按上述色譜條件測定，采用外標法計算淫羊藿苷含量，結果見表2。結合《中華人民共和國藥典》標準規定淫羊藿藥材中淫羊藿苷含量不低于0.5%[1]，暫定本品每1g含淫羊藿苷不低于8mg。表2淫羊藿苷含量測定結果（略）

3討論在供試品溶液制備中，曾分別比較了不同提取方式（回流法提取、超聲法提?。┘捌洳煌崛r間（15、30、45、60min）對淫黃膠囊樣品中淫羊藿苷的提取效率，結果兩種方式提取的效果基本一致。文中所選用的超聲法提取操作簡便，超聲45min可將樣品所含的淫羊藿苷提取。因該超聲提取法同時提取出較多雜質，本試驗根據淫羊藿苷的溶解性質[2]，再將提取液以乙酸乙酯提取、純化，結果能使供試品溶液中雜質大大減少，在保證被測成分提取的同時，減少了樣品對色譜柱的污染。對于流動相，將《中華人民共和國藥典》[1]中淫羊藿藥材含量測定項中的流動相調整為乙腈-水（25︰75，V/V），即可得到滿意的色譜分離效果。本試驗所建立的供試品溶液制備方法簡便、易行，含量測定方法準確、可靠，可用作淫黃膠囊中淫羊藿苷的含量測定方法。