首先我們來講暗場顯微鏡的結構和特點,為什么叫做暗場顯微鏡,在什么實驗能用到它,以及怎么用好它,相信在這篇文章你會有個詳細的了解。
首先是暗視場顯微鏡的原理,在我們的日常生活中,室內飛揚的微粒灰塵是不易被看見的,但在暗的房間中如果有一束光線從門縫斜射進來,光束中灰塵便可見了,這是光學上的丁達爾現象。暗視場顯微鏡就是利用此原理設計的。它的結構特點主要是使用遮光板或暗場聚光器,常用的是拋物面聚光器,使光源的光束被阻擋.不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光線改變途徑,傾斜地照射在觀察的標本上,標本遇光發生反射或散射,散射的光線投入物鏡內,因而整個視野是黑暗的。在暗場中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像.并非物體的本身,所以只能看到物體的存在和運動,不能辨清物體的細微結構。但被檢物體為非均質時,并大于1/2波長,則各級衍射光線同時進入物鏡,在某種程度上可觀察物體的構造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結構,但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動,這是普通顯微鏡(的分辨力為0.2um)所不具有的特性,可用以觀察活細胞的結構和細胞內微粒的運動等。
暗視場顯微鏡使用方法:
1.安裝暗場聚光器檢查聚光器的光軸(并非晶體光軸而指幾何光學光軸)是否與顯微鏡的光路一致。聚光鏡用中心調節旋鈕合軸調整之后,圈錐光束的交點集中到標本平面上。
2.放標本放置標本時在聚光鏡前透鏡與載物片之間必須浸油。否則來自標本細節的反射光和衍射光束在載物玻片表面進行全反射。觀察結果趨于失敗。
3.調節聚光鏡焦點操縱光源會聚透鏡務使圓錐形光束的交點照射到標本平面上。
4.迭擇物鏡用于暗場觀察的物鏡中.油浸系或水浸系的物鏡不能使用。就是干燥系物鏡中也要挑選鏡率在0.85以下為好。如果物鏡鏡口率過大時,來自聚光鏡的部分直射光束進入物鏡前透鏡,從而干擾暗視野成像效應。如果使用油浸系物鏡觀察時,必須調節物鏡內裝孔徑光欄。
5.光強的選擇暗場顯微鏡中光能損失太大。因此必須選擇光強的光源,才能取得較好效果。尤其以超聚光鏡觀察膠體微粒運動時,光強愈大愈好.
6.浸油的方法聚光鏡與載玻片間浸油時特別注意是否有氣泡。氣泡可招致暗視野觀察效果的破壞。
使用范圍:
暗場生物顯微鏡特別適用于觀察原蟲、細菌的鞭毛、偽足運動,醫學檢驗學范圍適用于觀察人體體液中螺旋體、尿管形、結晶或各種粒子