目前對奶粉中A、D3、E測定的前處理方法多采用皂化方法去除脂肪[1-7]，皂化過程后使用大量的有機溶劑進行液液萃取以洗除雜質(zhì)，操作步驟復雜，3樣品還需經(jīng)硅膠柱做進一步的凈化才能進行檢測，造成實驗時間成本的增加，不利于大批量樣品的檢測。本文研究了利用固相萃取法作為奶粉樣品的前處理方法，液相色譜法作為檢測手段，實現(xiàn)同時測定奶粉中、D3、E的含量，該方法可簡化奶粉樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

1. 樣品處理

皂化提取：2g奶粉加入1mL水混勻，加入1 mL VC/乙醇溶液破壁處理，混勻，加入10mL氫氧化鉀堿液（1.25g/mL），55℃條件下，水浴皂化45min，取出冷卻至室溫，向皂化液中加入適量無水乙醇，使之含50%乙醇，6000r/min離心5min后，取上清液，用1至2個微孔過濾器對其進行過濾，至Qdaura 卓睿™全自動固相萃取儀上樣管中作為待凈化液。

2. 固相萃取凈化

Qdaura^TM卓睿全自動固相萃取儀程序設(shè)定：5mL甲醇，和5mL水活化，加樣，10mL50%乙醇/水淋洗，抽干20min。2mL 丙酮，10mL乙酸乙酯洗脫，收集。收集液于40℃氮氣吹干，1mL甲醇定容，0.45um PTFE過濾器過濾，準備進液相色譜分析。

3. 色譜條件

液相色譜儀：LC-10F

色譜柱：Venusil MP C18，4.6 mm *150 mm，5µm；

流動相：甲醇；

流速：1mL/min；

柱溫：30℃；

進樣量：20µL；

波長變化見表1：

表1 波長變化梯度表

4. 結(jié)果與討論

圖1 低濃度維生素標準溶液的色譜圖

從左至右依次為：（5.0µg/mL）、3（9.8µg/mL）、（99µg/mL）

4.1 工作曲線及檢出限

根據(jù)儀器對各個物質(zhì)的響應(yīng)情況，將、D3、E分別由儲備液用正己烷逐級稀釋，各稀釋成7個濃度，濃度范圍為0.25µg/mL~25µg/mL，3濃度范圍為0.30µg/mL~30µg/mL，濃度范圍為2.5µg/mL~250µg/mL，將溶液進HPLC進行檢測，計算出檢出限，回歸方程及檢出限見表2。可見，液相色譜儀對、D3、E的響應(yīng)與濃度呈良好的線性關(guān)系。

表2 線性回歸方程及檢出限

圖2 皂化-固相萃取法色譜圖

4.2 皂化-固相萃取和傳統(tǒng)皂化-液液萃取法的實驗效果對比

傳統(tǒng)皂化-液液萃取法參考《GB 5413.9—2010食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中、D、E 的測定》的樣品前處理2個奶粉（每個樣稱取2g）的平行樣，作為參照。同時以皂化固相萃取法做兩個平行樣品。

表3 傳統(tǒng)皂化-液液萃取法與皂化固相萃取法的實驗結(jié)果對比

由于選用的奶粉VD含量較低，沒有檢出。

從上述對比可以看出，皂化固相萃取法相比國標的皂化液液萃取法具有簡單的優(yōu)勢，同時萃取效果更好。*的缺點是出峰靠前的附近有較多的弱保留物質(zhì)的干擾，但是依靠MP C18的*的分離能力，可以實現(xiàn)分離和干擾物質(zhì)的基線分離。同時這些弱保留的物質(zhì)很容易被洗脫出色譜柱，所以不會對色譜柱造成較大的污染。

4.2.3加標回收率實驗

表4 加標回收率及精密度

4.2.3 實際樣品檢測

根據(jù)所建立的方法分析了從市場上購買的3種品牌奶粉，分別編號為1號、2號和3號按照上述方法進行樣品處理和檢測，所得、D3和E的含量結(jié)果見表6。

圖7. 2號奶粉樣品色譜圖

表6 奶粉中維生素含量（µg/g）

4.3 結(jié)論

采用改進后的皂化-固相萃取方法來替代傳統(tǒng)的皂化法來測定奶粉中維生素含量，皂化能充分提取出奶粉中，D，E，再經(jīng)過Cleanert Vitamin固相萃取柱進行凈化吸附洗脫，既避免了傳統(tǒng)皂化中液液萃取中有機溶劑的大量使用，也簡化了操作步驟，同時能滿足一般奶粉樣品的含量分析要求。

5.訂貨信息