本發明屬于一種蠶蛹中人生長*類似脂蛋白的純化方法，方法包括蠶蛹預處理，人生長*類似脂蛋白的初步分離，用4號蛋白吸收峰的所得品進行親和層析純化和超濾濃縮等步驟。本發明能利用蠶蛹作為原料，通過分離純化獲得具有降低血液粘稠度，改善血液微循環的天然藥用蛋白，該方法操作簡便，且產量高，適用于大規模生產，提純的天然蛋白可作為保健藥物，無毒副作用。
一種蠶蛹中人生長*類似脂蛋白的純化方法，其特征在于：包括下步驟，(1)蠶蛹預處理，將新鮮蠶蛹與預冷的PBS液，溫度1～5℃，pH值為7.4，按重量比1∶1加入到榨汁機中勻漿30sec，在冰上冰浴4～8min，繼續勻漿，重復三次，使蠶蛹中的蛋白充分溶解，將所得品轉移到離心杯中4℃，12000rpm離心20min，取上清液通過九層紗布過濾除去大顆粒不溶雜質，將濾液再次離心過濾，重復三次，收集過濾后的濾液4℃，60％*酸銨沉淀蛋白，去除油脂，8000rpm離心30min，棄上清，用預冷的PBS液重懸沉淀，0.45μm濾膜真空抽濾，得預處理上清液，4℃保存；(2)人生長*類似脂蛋白的初步分離，

選擇AKTA?explorer10中的Size?Exclusion對預處理上清液進行分離并脫去色素，流動相為PBS液，pH值為7.4，壓力0.5Mpa，流速1.5ml/min；程序結束后，共出現6個蛋白吸收峰，根據目的出峰時間判斷第5和第6號蛋白吸收峰為17kDa以下的色素及小分子物質，人生長*類似脂蛋白，分子量30kDa，應出現在第4號峰，因此收集前面4個蛋白吸收峰，并進行SDS?PAGE電泳和Western?Blot檢測，結果表明人生長*類似脂蛋白存與第4號蛋白峰中，用4號蛋白吸收峰的所得品進行后續純化；(3)親和層析純化，用4號蛋白吸收峰的所得品進行親和層析純化，親和層析柱的制備取2mL?50％的Plus?coupling?Resin裝入柱殼中，平衡至室溫，放出殘余液體，加入3倍柱體積Coupling?Buffer，0.1M?Sodium?phosphate，0.15M?NaCl，pH值為7.2，平衡柱子，之后加入2mL?hGH標準品1mg/ml和40μL?Cyanoborohy?dride，室溫下搖床孵育4h或4℃保持7～9h，在通風櫥里打開蓋子，收集放出的液體，

用BCA蛋白定量，計算偶聯效率；再加入5倍柱體積Quenching?Buffer，1M?Tris?HCl，pH值為7.4，0.05％NaN3，洗填料，之后加入2mL?Quenching?Buffer和40μL?Cyanoborohy?dride，室溫下搖床孵育30min；在通風櫥打開蓋子放出反應的氣體和溶液，加入5倍體積Wash?Solution，1M?NaCl，0.05％NaN3洗柱子；再用Coupling?Buffer平衡柱子，4℃保存；親和純化人生長*類似脂蛋白，室溫平衡柱子，之后打開蓋子棄去保護液，用5倍柱體積的Binding?Buffer，0.15M?PBS，pH值為7.4，再次平衡柱子；所得品經過0.45μm濾膜過濾后上柱，室溫搖床孵育1h，放出溶液，用Wash?Buffer，0.15M?PBS，pH7.4，洗去未結合樣品，*后加入Elution?Buffer(0.1MGlycine?HCl，pH值為2.5，洗脫結合在柱子上的蛋白，用Neutralization?Buffer，0.5M?Tris?HCl，pH值為8.5，調pH值至中性；收集樣品，BCA蛋白定量后進行SDS?

PAGE電泳檢測；(4)超濾濃縮，使用中空纖維膜進行超濾，選擇合適的中空纖維膜規格，截留分子量為3kDa，進行清洗后加樣，用適量無菌PBS，pH值為7.4，超濾濃縮，無菌分裝，?50℃冷凍干燥，制成凍干粉，得本發明的成品。